只因不小心被一只受過放射性感染的蜘蛛咬傷，平凡瘦弱的高中生彼得·本杰明·帕克（尼爾·帕特里克·哈里斯 Neil Patrick Harris 飾）的人生便發生了翻天覆地的變化。從此以后，他穿上紅藍相間的緊身服，戴上面具，憑借發射出的蜘蛛絲穿梭在喧嘩鬧市的每一個角落。“能力越大，責任越大”，彼得以蜘蛛俠的身份，和破壞城市及世界和平的惡勢力作斗爭。全新的征程，更強大的敵人，女武士鹿田、The Talon、電王（Ethan Embry 配音）、蜥蜴人（羅布·贊比 Rob Zombie 配音）、銀貂（Virginia Madsen 配音）等可怕對手相繼登場。蜘蛛俠從不退卻，勇敢地迎上前去……本片為采用3D技術制作的新版動畫。
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